液相色譜柱是高效液相色譜系統(tǒng)的核心部件，其性能直接影響分離效果和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。當(dāng)色譜柱出現(xiàn)柱效下降、壓力異常升高或無(wú)法滿足分離需求時(shí)，需及時(shí)更換。以下是液相色譜柱更換的詳細(xì)流程、注意事項(xiàng)及維護(hù)建議。
一、更換前的準(zhǔn)備
1. 確認(rèn)新柱規(guī)格
- 核對(duì)新色譜柱的型號(hào)、填料類型(如C18、硅膠基質(zhì)等)、粒徑(如5 μm、3 μm)、孔徑、pH耐受范圍及流速上限，確保與原有系統(tǒng)兼容。
- 檢查流動(dòng)相體系是否與新柱匹配(如反相柱需避免使用強(qiáng)堿性流動(dòng)相)。
2. 工具與材料準(zhǔn)備
- 專用扳手(用于擰緊柱接頭)、清潔紙巾、廢液容器、適合的流動(dòng)相(如甲醇、乙腈或超純水)。
- 若使用UHPLC系統(tǒng)，需確認(rèn)新柱的壓力耐受值(通常≥100 bar)。
3. 系統(tǒng)狀態(tài)檢查
- 記錄當(dāng)前系統(tǒng)的運(yùn)行參數(shù)(如流速、壓力、波長(zhǎng)等)，以便更換后對(duì)比。
- 提前配制足量的新流動(dòng)相，并脫氣處理。
二、停機(jī)與舊柱拆卸
1. 停機(jī)操作
- 停止泵運(yùn)行，關(guān)閉檢測(cè)器(如UV燈)、自動(dòng)進(jìn)樣器等模塊電源，避免系統(tǒng)壓力突變導(dǎo)致液體噴濺。
- 打開排泄閥，釋放系統(tǒng)內(nèi)殘余壓力。
2. 拆卸舊柱
- 斷開入口端接頭：用扳手逆時(shí)針擰動(dòng)入口管路螺母，小心取下管路，避免液體灑出。
- 標(biāo)記方向：記錄舊柱標(biāo)簽上的流向箭頭(通常為“IN”和“OUT”)，確保新柱安裝方向一致。
- 取出舊柱：垂直向上拔出色譜柱，避免碰撞柱管導(dǎo)致物理?yè)p傷。
- 清理接頭：用甲醇或異丙醇擦拭舊柱兩端的接頭，清除殘留顆?；蚓彌_鹽。
三、新柱安裝與系統(tǒng)重啟
1. 安裝新柱
- 檢查密封墊：確認(rèn)柱兩端的密封墊(如PEEK或不銹鋼材質(zhì))無(wú)破損，必要時(shí)更換。
- 對(duì)齊方向：嚴(yán)格按照“IN”端接泵、“OUT”端接檢測(cè)器的方向安裝，裝反會(huì)導(dǎo)致分離失效。
- 擰緊接頭：用手將管路螺母旋至接觸柱體，再用扳手輕壓至密封(通常1/4~1/2圈)，避免過(guò)度用力導(dǎo)致柱頭損壞。
2. 系統(tǒng)沖洗與平衡
- 初始流速：以較低流速(如0.2~0.5 mL/min)通入新流動(dòng)相，排出柱內(nèi)空氣。
- 梯度平衡：若舊流動(dòng)相與新柱不兼容(如從含緩沖鹽切換至純有機(jī)相)，需分段過(guò)渡(如先用甲醇沖洗，再切換至目標(biāo)流動(dòng)相)。
- 基線穩(wěn)定：持續(xù)沖洗15~30分鐘，直至檢測(cè)器基線平穩(wěn)(UV噪聲<0.5 mAU)，壓力值正常。
四、性能驗(yàn)證與參數(shù)優(yōu)化
1. 測(cè)試分離效果
- 注入標(biāo)準(zhǔn)樣品(如萘、甲苯等非保留物質(zhì)或目標(biāo)分析物)，檢查峰形是否對(duì)稱、柱效(以塔板數(shù)衡量)是否達(dá)標(biāo)。
- 對(duì)比新舊柱的保留時(shí)間、分離度及理論塔板數(shù)，確認(rèn)新柱性能恢復(fù)。
2. 調(diào)整運(yùn)行參數(shù)
- 根據(jù)新柱特性微調(diào)流速(如粒徑更小的填料需降低流速)、柱溫或梯度程序。
- 避免超過(guò)新柱的壓力上限(如常規(guī)C18柱壓力限制為40~60 bar)。
五、注意事項(xiàng)與常見(jiàn)故障處理
1. 關(guān)鍵操作禁忌
- 禁止反向安裝：裝反會(huì)導(dǎo)致固定相流失、柱壓驟升甚至堵塞。
- 避免干柱狀態(tài)：柱內(nèi)無(wú)流動(dòng)相時(shí)切勿運(yùn)行泵，否則會(huì)損壞填料。
- 慎用強(qiáng)酸/堿：超出柱子pH耐受范圍(如硅膠柱pH 2~8)會(huì)加速填料溶解。
2. 典型問(wèn)題排查
- 壓力異常：若新柱壓力遠(yuǎn)高于舊柱，檢查接頭是否漏液、填料是否堵塞或流速設(shè)置過(guò)大。
- 峰形拖尾：可能因流動(dòng)相未充分平衡、樣品過(guò)載或舊柱污染殘留。
- 氣泡問(wèn)題：系統(tǒng)重啟后需排氣，可通過(guò)快速?zèng)_洗或超聲波處理消除。
六、色譜柱的日常維護(hù)
1. 使用后保養(yǎng)
- 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，用純?nèi)軇?如甲醇或乙腈)沖洗管路和柱子，防止緩沖鹽結(jié)晶堵塞。
- 長(zhǎng)期不用時(shí)，卸下柱子并存于密閉容器中，避免填料干燥或污染。
2. 壽命延長(zhǎng)技巧
- 控制樣品濃度和進(jìn)樣量，避免超載。
- 定期再生離子交換柱或硅膠柱(如用低濃度酸/堿沖洗)。
- 存儲(chǔ)時(shí)注明柱子的使用歷史(如已承受的pH范圍、溶劑類型)。
七、特殊柱子的更換要點(diǎn)
1. 手性色譜柱：需嚴(yán)格避光保存，流動(dòng)相中避免使用紫外吸收雜質(zhì)。
2. 寬口徑制備柱：更換時(shí)注意接頭匹配性，流速需階梯式提升以防填料移位。
3. 親水相互作用柱(HILIC)：初次使用時(shí)需長(zhǎng)時(shí)間平衡(>1小時(shí))，流動(dòng)相中需含高比例有機(jī)相。
